کلون سازی و بیان گلیکوپروتئین سطحی ویروس هاری در سلولهای یوکاریوتی

ویروس هاری متعلق به خانواده رابدوویریده (rhabdoviridae) و جنس لیساویروس (lyssavirus) می باشد. این ویروس در تمام حیوانات خونگرم از جمله انسان می تواند ایجاد بیماری کند. با توجه به اینکه هاری با سالیانه میانگین 55000 مورد مرگ و میر که بیش از 99 درصد آن در کشورهای آسیا و آفریقا اتفاق می افتد، گسترش جهانی دارد. از اینرو تکنولوژی تولید واکسنهای نوترکیب امروزه مورد توجه واقع شده است. یکی از روشها برای توسعه واکسن هاری نسل جدید، استفاده از واکسنهای مبتنی بر dna یا پلاسمید کد کننده ژن گلیکوپروتئین هاری است. گلیکوپروتئین ویروس هاری در سطح خارجی غشای ویروس قرار دارد و آنتی ژن اصلی ویروس برای تولید آنتی بادی خنثی کننده بر علیه عفونت کشنده با ویروس است و در فعالیتهای ایمونوژنیک و آنتی ژنیک ویروس نقش اساسی دارد. در مطالعات صورت گرفته مشخص شده است که در فرآیند تولید واکسنهای موثر، نقش گلیکوزیلاسیون در ایمنی زایی واکسن بسیار حائز اهمیت است، از اینرو انتخاب سیستم بیانی بسیار با اهمیت می باشد. در پژوهش حاضر پس از سنتز ژن گلیکوپروتئین این ویروس، در وکتور بیانی pcdna3.1(+) ساب کلون شد و پس از انجام مراحل تایید کلونینگ، پلاسمید نوترکیب به سلول bsr انتقال یافت. جهت بررسی تولید پروتئین نوترکیب در سیستم‎ یوکاریوتی، از روش های sds-page و وسترن بلاتینگ استفاده گردید. به منظور پاسخ دهی dna واکسن، از مدل موشیnmri پنج هفته استفاده گردید. همچنین جهت افزایش پاسخ ایمنی، از تزریق دو دوز واکسن و در هر دوز میزان 80 میکروگرم، استفاده شد. استراتژی واکسیناسیون به روش پرایم-بوست در مورد بیماری هاری که شامل استفاده از dna واکسن بر علیه هاری و واکسن کشته شده ویروس هاری شده و یا برعکس می باشد نیز مورد بررسی قرار گرفت. پس از جمع آوری سرم، به منظور بررسی ایمنی هومورال از روش rffit، برای سنجش آنتی بادی استفاده شد. با توجه به اینکه نتایج استراتژی واکسن پرایم-بوست ویروس هاری نزدیک به ویروس کشته شده می باشد، در صورتی که با آدجوانت های مناسب تزریق شود، احتمالاً می تواند جایگزین مناسبی در جهت کاهش هزینه های تولید و نگهداری واکسنهای موجود شود.